龙巅
转一篇NO2分解法的文章!申请加精,
2011-04-21 17:55:48
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申请加精的原因不是为了炫耀,是为了让更多鱼友能看到这个文章,文章是转载的,希望能帮到鱼友.我就被NO2困扰了很久.废话不说看原文吧!!!!
从养殖户的实际操作上来看，亚硝酸盐中毒一直是养殖过程中非常棘手的问题，往往会给养殖户带来相当快速且严重的危害。但目前对减缓亚硝酸的中毒，尚无有效且可靠的方法可用。本计划筛选到一株兼气性的细菌，命名为『海生一号』菌（MB1）。MB1可以去除培养基中的NO2-。在实验室中对MB1进行模拟养殖实验，发现MB1一样会分解水中的NO2-，且也不会造成鱼虾紧迫（Stress）和死亡。此外MB1对养殖池中的NO2-一样具有清除功能。依据实验室初步的结果，证实MB1具有去除养殖池中NO2-的能力，故MB1应具有推广应用的价值。
由于台湾养殖土地资源有限，因此水产养殖均朝向高密度、集约式养殖发展，然而集约式养殖完全是配合饲料养殖，当养殖池中细菌生态系统或氧化链被破坏时，会因水中未吃完的残饵、鱼虾的排泄物及分泌物，经腐化而造成水质的恶化。这些腐烂的物质在水中会释放出含氮化合物，如氨、亚硝酸盐等。从养殖户的实际操作上来看，亚硝酸盐中毒一直是养殖过程中非常棘手的问题，往往会给养殖户带来严重的危害。当水中亚硝酸盐浓度积累到0.1毫克/升后，会造成鱼、虾慢性中毒，严重时则发生暴发性死亡。高浓度的亚硝酸盐，会常使鱼类的抗病力降低，而容易罹患各种疾病，因此高浓度的亚硝酸盐常被视为鱼类致病的根源。
到目前对亚硝酸盐的降解，尚无有效的方法可用，仅能以不同的方法来『缓解或降低』亚硝酸盐所带来的伤害。目前常用的方法有：（1）稀释法：将池子里的水抽出部份，再补进新的水，藉以降低亚硝酸盐的浓度（2）增氧法：增加池水有的溶氧量，以促进亚硝酸盐向硝酸盐的转化，从而降低水体中亚硝酸盐的含量；（3）吸附法：使用具有高吸附亚硝酸根能力的物质，例如：沸石粉、活性碳等，将亚硝酸根吸附在其中；（4）微生物降解法：利用硝化菌将亚硝酸盐转化成为硝酸盐。目前在台湾对减缓亚硝酸的中毒，最常用的方法就是『稀释法』和『吸附法』，但其成效不彰。在目前生态养殖观念中，最值得推广的是利用硝化菌降解亚硝酸根，但目前市面上有许多标示具降解亚硝酸根的硝化菌产品，其效果要不是没有办法达到预期，或就根本是里面掺入大量吸附剂来误导养殖户。因此能找到有效去除亚硝酸根之细菌，并将其商品化，这对台湾国内养殖业及国土保育绝对是有正面的帮助。
材料和方法：
菌株之筛选：
利用接种环沾养殖池池水，均匀划线在LB plate上，置于37℃隔夜培养。再用接种环沾单一菌落，均匀划线在LB plate上，置于37℃隔夜培养，重复此步骤至少三次。
亚硝酸的侦测：
利用Tetratest NO2-侦测试剂来侦测，其操作方法详如操作手册。
分析在培养基中降解亚硝酸的能力：
挑单一菌落的MB1和JM109，分别置于含有20ppm NO2- 5ml之LB培养基中，隔夜培养。
对白虾的毒性测试：
挑单一菌落的MB1和JM109，置于5ml之LB培养基中，隔夜培养。将3克的饲料与5ml的菌液充分混合。每天喂湿重0.5克的饲料。
分析对养殖池之池水降解亚硝酸的能力：
挑单一菌落的MB1和JM109，置于5ml之LB培养基中，隔夜培养。5ml的池水分别加入100ml的隔夜培养菌液，培养16小时。
结果：
本实验室筛选到一株兼气性的细菌，命名为『海生一号』菌（MB1）。此菌可以在LB中培养，生长温度从25℃到37℃。在实验中发现，挑单一菌落，在含有100mg的NO2-的5ml LB中，即约培养基中含有20ppm的NO2-，室温下隔夜培养，即可将20ppm的NO2-分解到以Tetratest NO2-侦测试剂侦测不到，意即是0ppm的NO2-，如图一所示。此结果证明MB1可以有效去除培养基中的NO2-。
图一、MB1对NO2-的影响。挑单一菌落的MB1和JM109，分别置于含有20ppm NO2- 5ml之LB培养基中，隔夜培养。NO2-的侦测是利用Tetratest NO2-侦测试剂来侦测。黄色代表不含NO2-。JM109做为实验对照组用。
为测试MB1是否会对鱼虾产生毒性，及在正常的养殖状况是否依旧有效。我们从高雄县蚵仔寮的养殖户中取得白虾，于实验室中利用水族缸饲养，藉以了解MB1是否会对白虾产生毒性，及是否依旧能有效的去除NO2-。从图二得知，MB1不会对白虾造成任何的毒性，反而会增加存活率。对于NO2-的降解效果，从图三得知，MB1对于养殖缸中NO2-，一样有降解功能。
图二、MB1对白虾的毒性测试。挑单一菌落的MB1和JM109，置于5ml之LB培养基中，隔夜培养。将3克的饲料与5ml的菌液充分混合。每天喂湿重0.5克的饲料。每缸养10只白虾。重复三次。JM109做为实验对照组用。
图三、MB1对养殖缸中NO2-含量的影响。挑单一菌落的MB1和JM109，置于5ml之LB培养基中，隔夜培养。将3克的饲料与5ml的菌液充分混合。每天喂湿重0.5克的饲料。取养殖缸中1ml的水来侦测NO2-的含量。NO2-的侦测是利用Tetratest NO2-侦测试剂来侦测。黄色代表不含NO2-。JM109做为实验对照组用。
为测试MB1是否会产生紧迫而降低鱼的存活率，及在实际养殖的水生环境中依旧会降解NO2-。在初步实验中，以实验室所饲养的孔雀鱼当作实验材料，发现投放MB1并不会对孔雀鱼的外观与活力产生影响，同时仍会降低鱼缸中的NO2-含量。
为再进一步了解MB1在真正养殖池的水中，是否仍具有去除NO2-的能力。我们从高雄县永安取得石斑鱼苗养殖池的池水，及从高雄县蚵仔寮的养殖户中取得养殖池的池水，在初步实验中，分别于5ml的池水中，加入MB1 100ml的菌液，培养16小时，发现MB1仍会去除养殖池中的NO2-，其结果如图四所示。
图四、MB1对(A) 石斑鱼苗池之池水和(B) 虱目鱼池之池水中NO2-含量的影响。挑单一菌落的MB1和JM109，置于5ml之LB培养基中，隔夜培养。5ml的池水分别加入100ml的隔夜培养菌液，培养16小时。重复三次。NO2-的侦测是利用Tetratest NO2-侦测试剂来侦测。黄色代表不含NO2-。JM109做为实验对照组用。
田间测试结果：
• 明显降低虱目鱼鱼池中亚硝酸含量，至少5倍；明显增加摄食量及速度，约2倍。
• 在50吨的海水加入300毫升的MB1，2天内将其海水中的亚硝酸含量，降至『0』。
• 在3000吨的盐水中加入10公升的MB1，2天内将其水中的亚硝酸含量，从2ppm降为0.25ppm。
• 明显增加观赏鱼的摄食量及速度。
讨论：
依据初步实验室和田间测试的结果，证实MB1具有去除水中NO2-的能力，因此MB1应具有推广应用的价值。将来将继续完成10~20吨水槽养殖试验，并建立100~1000公升菌种发酵制程。完成实验室实验初级产品生产，及初级产品田间投放实验。藉由完成田间的实际养殖确认，以便日后做为将MB1商品化之依据。
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